重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

doi:10.3969/j.issn.1674-490X.2012.01.002

医学研究与教育 ›› 2012, Vol. 29 ›› Issue (1): 7-11,43.DOI: 10.3969/j.issn.1674-490X.2012.01.002

重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞

张平¹,赵钢勇²,陈凯³,宋月平¹,康增军¹,苏立凯¹

1.河北大学附属医院神经内科,河北保定,071000
2.河北大学生物工程技术研究中心,河北保定,071000
3.河北工程大学农学院,河北邯郸,056001

出版日期:2012-02-25 发布日期:2012-02-25
基金资助:
河北省科学技术研究与发展计划项目

Study on construction of recombinant plasmid pIRESneo-EGFP-BDNF and its expression in bone mesenchymal stem cell in mice

ZHANG Ping¹,ZHAO Gangyong²,CHEN Kai³,SONG Yueping¹,KANG Zengjun¹,SU Likai¹

Online:2012-02-25 Published:2012-02-25

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染至骨髓间充质干细胞(MSCs)制备BDNF基因工程细胞的方法. 方法将pEGFP(N1)-BDNF质粒进行改造与pIRESneo相连结,构建携带BDNF的高拷贝质粒pIRESneo-EGFP-BDNF,采用电转染技术转染骨髓MSCs,经G418筛选,通过倒置荧光显微镜判断转染效率,采用Western blot方式判定转染细胞是否表达BDNF蛋白. 结果经过双酶切鉴定,pIRESneo-EGFP-BDNF携带EGFP及BDNF基因,以EGFP为报告基因,质粒构建成功；通过电穿孔技术以及G418筛选,提高pIRESneo-EGFP-BDNF转染骨髓MSCs效率. 结论 成功制备高效表达携带BDNF基因的质粒,且转染骨髓MSCs,为进一步开展BDNF基因治疗神经系统变性疾病奠定基础.

关键词: 脑源性神经生长因子, 间充质干细胞, 质粒, 转染

中图分类号:

Q343

引用本文

张平,赵钢勇,陈凯,宋月平,康增军,苏立凯. 重组质粒pIRESneo-EGFP-BDNF构建及转染骨髓间充质干细胞[J]. 医学研究与教育, 2012, 29(1): 7-11,43.

ZHANG Ping,ZHAO Gangyong,CHEN Kai,SONG Yueping,KANG Zengjun,SU Likai. Study on construction of recombinant plasmid pIRESneo-EGFP-BDNF and its expression in bone mesenchymal stem cell in mice[J]. Medical Reserch and Education, 2012, 29(1): 7-11,43.

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参考文献

[1] 陈凯, 康现江, 张平, 穆淑梅, 郭明申. 大鼠海马神经干细胞的分离培养与免疫荧光鉴定 [J]. 医学研究与教育 2010.doi:10.3969/j.issn.1674-490X.2010.02.001
[2] 王士彬, 孙才新, 姚陈果, 米彦, 熊兰, 李成祥, 胡丽娜. 电穿孔技术的研究及应用进展 [J]. 国外医学（生物医学工程分册） 2005.doi:10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2005.06.013
[3] Siegel GJ, Chauhan NB. Neurotrophic factors in Alzheimer's and Parkinson's disease brain. [J]. Brain research. Brain research reviews 2000, 2/3(2/3).
[4] MUFSON E J, COUNTS S E, FAHNESTOCK M. Cholinotrophic molecular substrates of mild cognitive impairment in the elderly [J]. Current Alzheimer Research 2007, 4(04).
[5] Bramham CR, Messaoudi E. BDNF function in adult synaptic plasticity: the synaptic consolidation hypothesis. [J]. Progress in Neurobiology: An International Review Journal 2005, 2(2).
[6] Nagahara AH, Merrill DA, Coppola G, Tsukada S, Schroeder BE, Shaked GM, Wang L, Blesch A, Kim A, Conner JM, Rockenstein E, Chao MV, Koo EH, Geschwind D, Masliah E, Chiba AA, Tuszynski MH. Neuroprotective effects of brain-derived neurotrophic factor in rodent and primate models of Alzheimer's disease. [J]. Nature medicine 2009, 3(3).
[7] Griesbach GS, Gomez Pinilla F, Hovda DA. [J]. Brain research 2004.
[8] OYESIKU N M, EVANS C O, HOUSTON S. Regional changes in the expression of neurotrophie factors and their receptors following acute traumatic brain injury in the adult rat brain [J]. Brain Research 1999, 833(02).
[9] Pardridge WM. Targeting neurotherapeutic agents through the blood-brain barrier. [J]. Archives of Neurology 2002, 1(1).
[10] Valero, A, Post, JN, van Nieuwkasteele, JW, ter Braak, PM, Kruijer, W, van den Berg, A. Gene transfer and protein dynamics in stem cells using single cell electroporation in a microfluidic device [J]. Lab on A Chip 2008, 1(1).
[11] Valero A, Post JN, van Nieuwkasteele JW, ter Braak PM, Kruijer W, van den Berg A. Gene transfer and protein dynamics in stem cells using single cell electroporation in a microfluidic device [J]. Lab on a chip 2008, 1(1).
[12] Meinel L, Hofmann S, Betz O, Fajardo R, Merkle HP, Langer R, Evans CH, Vunjak Novakovic G, Kaplan DL. Osteogenesis by human mesenchymal stem cells cultured on silk biomaterials: comparison of adenovirus mediated gene transfer and protein delivery of BMP-2. [J]. Biomaterials 2006, 28(28).
[13] KYRIAKOU C A, YONG K L, BENJAMIN R. Human mesenchyrnal stem cells(hMSCs)expressing truncated soluble vascular endothelial growth factor receptor(tsFlk-1)following lentiviral-mediated gene transfer inhibit growth of Burkitt's lymphoma in a murine model [J]. J G ene Med 2006, 8(03).
[14] Plotnikov, AN, Shlapakova, I, Szabolcs, MJ, Danilo-P, Jr, Lorell, BH, Potapova, IA, Lu, Z, Rosen, AB, Mathias, RT, Brink, PR, Robinson, RB, Cohen, IS, Rosen, MR. Xenografted adult human mesenchymal stem cells provide a platform for sustained biological pacemaker function in canine heart. [J]. Circulation 2007, 7(7).
[15] Ferreira E, Potier E, Logeart-Avramoglou D, Salomskaite-Davalgiene S, Mir LM, Petite H. Optimization of a gene electrotransfer method for mesenchymal stem cell transfection. [J]. Gene therapy 2008, 7(7).

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[7]	瞿海龙,边剑飞,张冰,王颖,周英莲. 间充质干细胞临床应用的前景与困惑[J]. 医学研究与教育, 2011, 28(5): 72-75.
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